摘要：通过研究两种酶对精巢细胞的消化效果,探究抗冻剂、降温程序、糖类和卵磷脂对达氏鲟(Acipenser dabryanus)精巢细胞冻存效果的影响,获得消化冻存后高存活率的细胞。实验使用0.25%胰蛋白酶和2 mg/m L胶原酶H+500 U/m L中性酶II的组合酶对达氏鲟精巢细胞进行消化,获得不同消化时间内的活细胞数量。另外,还研究了冷冻稀释液中分别添加10%二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甲醇(MET)作为抗冻剂,采用-1℃/min慢速降温以及直接投入液氮中的快速降温方法冻存,冷冻稀释液采用D-海藻糖或同浓度D-蔗糖,以及添加5%,8%,11%卵磷脂对冻存效果的影响。结果显示:两种消化酶在同一时间消化所得的活细胞数和活细胞率无显著差异,并且都在3 h获得最多活细胞。慢速降温的冻存效果极显著地好于快速降温(P=0.01)。不同抗冻剂的保存效果差异显著,复苏后细胞相对存活率EG(51.70%±5.24%)>MET(45.09%±3.15%)>DMSO(40.18%±3.90%)。不同糖对达氏鲟精巢细胞冻存效果无显著影响(P>0.05);不同浓度的卵磷脂冻存效果有极显著差异(P=0.01)。含8%卵磷脂的冻存液对细胞的冻存效果最好,细胞存活率可达93.55%±2.56%,培养10 d后细胞数目为0 d时的3.19倍。

颉璇, 厉萍,  席萌丹, 郭威, 乔新美, 杜浩, 刘志刚, 危起伟*. 达氏鲟精巢细胞消化分离和超低温冷冻保存. 淡水渔业, 2016, 46 (5): 19-24.

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